全自動(dòng)核酸純化儀在核酸檢測(cè)中經(jīng)常用到，在核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室拿到樣本之后，進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí)，首先要做的就是使用全自動(dòng)核酸純化儀將樣本中的核酸提取出來(lái)，提取出的核酸直接關(guān)系到后續(xù)的檢測(cè)，一般核酸提取的主要步驟分為四步：裂解、吸附、洗滌和洗脫，每一步出現(xiàn)問(wèn)題都會(huì)影響磁珠的提取效率。

 

　　一、樣本裂解是裂解細(xì)胞或病原體，釋放里面的核酸。影響裂解的主要因素有裂解液的成分及裂解的溫度和時(shí)間。

 

　　裂解液成分：對(duì)于一些難裂解的樣本，可以通過(guò)提高胍鹽濃度以及表面活性劑濃度來(lái)增強(qiáng)裂解液的裂解能力。

 

　　裂解溫度和時(shí)間：提高溫度和增加裂解時(shí)間可以讓細(xì)胞裂解更*，得到更多核酸，需要摸索合適的溫度和時(shí)間；溫度過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，也有可能導(dǎo)致核酸斷裂或醇類(lèi)揮發(fā)導(dǎo)致的提取效率下降。

 

　　二、吸附是磁珠吸附核酸的能力，影響吸附能力的有磁珠的吸附能力以及結(jié)合緩沖液的結(jié)合能力。磁珠吸附能力受到磁珠比表面積以及修飾基團(tuán)的密度影響?？筛鶕?jù)實(shí)際樣本選擇磁珠粒徑和修飾基團(tuán)。

 

　　三、洗滌是去除DNA以外的RNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。關(guān)系到核酸的純度，磁棒的振蕩幅度和混合時(shí)間會(huì)影響洗滌效率。磁棒振蕩幅度太小或混合時(shí)間太短，有雜質(zhì)殘留在磁珠上會(huì)影響磁珠吸附核酸的能力。振蕩太劇烈或時(shí)間太長(zhǎng)，會(huì)丟失部分核酸或造成核酸的斷裂、降解，得率下降。

 

　　四、洗脫是解離吸附在磁珠上的DNA，得到純度和濃度均很高的DNA，直接影響核酸得率，影響洗脫效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脫溫度和時(shí)間。磁珠未充分晾干，可能會(huì)有醇類(lèi)等雜質(zhì)殘留，影響后續(xù)PCR反應(yīng)；磁珠過(guò)分干燥，核酸可能會(huì)干結(jié)在磁珠上，導(dǎo)致洗脫效率下降。適當(dāng)提高洗脫溫度和時(shí)間，有利于核酸從磁珠上游離下來(lái)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或溫度過(guò)高，核酸有可能會(huì)降解，需要把握其中的平衡。

 

　　注意以上四點(diǎn)，利用全自動(dòng)核酸純化儀即可完成核酸檢測(cè)試驗(yàn)。